尊龙凯时推出的BBcellProbe®细胞膜染色试剂DiI(BB-441916)是一种橙色荧光标记的细胞膜探针,具有549nm的最大激发波长和565nm的最大发射波长。这款染色试剂通过与细胞膜中的脂质分子结合而标记细胞,适合用于监测细胞运动及定位分析。由于其出色的染料维持性,DiI展现出强而稳定的橙红色荧光,能够与绿色荧光染料和蛋白质进行良好的荧光分辨,适合在多重指标染色实验中使用。
当亲脂性的荧光探针DiI进入细胞膜后,可以在细胞膜上迅速扩散,并在最佳浓度下实现整个细胞膜的均匀染色。值得注意的是,染色液在进入细胞膜之前荧光强度较弱,但与细胞膜结合后,其荧光强度会显著增强,被激发后便能发出明亮的橙色荧光,具备较高的淬灭常数和激发态寿命。
此外,荧光探针DiI通常不会显著影响细胞活力,因此被广泛应用于正向或逆向的活细胞及固定神经细胞的示踪剂,具有长期示踪的优越性。除了基本的细胞膜荧光标记,DiI还可用于检测细胞的融合与粘附,观察细胞在发育或移植过程中的迁移,以及通过荧光恢复后光漂白(FRAP)技术分析脂质在细胞膜上的扩散情况,检测细胞毒性和标记脂蛋白等重要研究。
在合理的工作浓度下,此染料不会对细胞产生毒性,且不会影响细胞的活力和增殖能力。用于检测的方法包括激光共聚焦显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪,适合悬浮细胞及贴壁细胞的样本类型。
在使用过程中,需要将探针DiI根据样本数量以500至2500倍的比例用HBSS或其他适合的无血清培养基稀释,配制成染色工作液。对于悬浮细胞,使用PBS清洗细胞两次后,加入染色工作液并重悬细胞,37℃下孵育,初始孵育时间可设为20分钟,再根据实际情况优化,以达成均一的标记效果。
对于贴壁细胞,则在细胞培养板或爬片上加入适量染色工作液,并在37℃下孵育,孵育过程后使用培养液洗涤细胞,以去除未结合的染料。最终,可以利用荧光显微镜或流式细胞仪检测,确保激发波长为549nm, 最大发射波长为565nm,获得清晰的实验结果,为后续的生物医疗研究提供可靠数据。