校正染料（ROX）用于校正实验中的加样误差或孔与孔之间的误差，提供了一个稳定的基线，有效提高了定量分析的精确度和重复实验的数据重现性。需要注意的是，不同仪器对ROX的需求可能存在差异。在基线PCR的初期阶段，荧光信号几乎没有变化，阈值即为可信的最小荧光值，而CT值则是扩增曲线与阈值交点的横坐标。

结果有效性判断

在判断实验结果的有效性时，应注意以下几个方面：

• 融解曲线需要呈现单峰（染料法）
• 扩增曲线应处于指数扩增区域，复孔间CT值的标准差（STD）需小于0.2

阈值设置的合理性至关重要，需确保阈值位于指数增长期。仪器会自动计算阈值，但在某些情况下，结果可能不尽合理，需根据实际情况进行手动调整。

对于无模板对照（NTC），可以用来确认无气溶胶污染或视为可以忽略。NTC即NoTemplateControl（qPCR反应中，使用水代替模板）；如果ΔCT=NTC(CT值) - 目的基因(CT值)≥3或≥5，可以认为体系中的气溶胶污染不会影响实验结果的准确性。

另外，无逆转录对照（NRT）可用于确认无基因组残留或视为可以忽略。NRT即NoRTControl（逆转录反应中，除了逆转录酶，其他组分正常添加）；若ΔCT=NRT(CT值) - 目的基因(CT值)≥3或≥5，同样表示体系中的基因组残留不会影响实验结果的准确性。

待测CT值如果处于线性范围内，且扩增效率符合计算标准，即PCR扩增效率（e）在90%-120%之间，这样的检测结果更具可靠性。

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