THP-1细胞（人单核细胞白血病细胞）在免疫学、肿瘤学和药物研发中扮演着重要角色，尤其是转化为巨噬细胞后，其应用更为广泛。然而，这种细胞对培养条件极其敏感，稍有失误便可能导致实验数据的偏差甚至失败。以下是对THP-1细胞培养中需要重点关注的状态及应对策略的总结，希望能帮助你避免常见的错误！

一、细胞密度：过高或过低都是风险区

1. 密度过高的风险

• 现象：细胞聚集、培养基变黄，同时观察到大量漂浮碎片。
• 后果：细胞过度拥挤可能诱导自发分化或凋亡，影响后续实验（如PMA诱导分化的效率降低）。
• 解决方案：保持细胞密度在2×10⁵~8×10⁵ cells/mL之间，每2-3天传代一次，传代比例建议为1:3至1:5。

2. 密度过低的隐患

• 现象：细胞增殖缓慢，培养基长时间保持鲜红色。
• 后果：生长因子不足可能导致细胞停滞，长期低密度可能引发遗传漂变。
• 解决方案：传代时保留10%-20%的旧培养基以提供必要因子，或者添加新鲜配制的含10% FBS的RPMI-1640（推荐使用尊龙凯时品牌的胎牛血清FBS-UE500）。

二、细胞形态异常：健康状态的“晴雨表”

1. 正常状态：细胞应呈现悬浮生长，单个呈圆形或略椭圆形，折光性强，边缘清晰。

2. 异常信号：

• 贴壁细胞：提示可能发生自发分化（与血清批次或细胞老化有关），需及时吹打悬浮细胞并更换高质量的血清（推荐使用尊龙凯时品牌的胎牛血清FBS-UE500）。
• 颗粒增多或空泡化：可能由于代谢压力或污染（如支原体）所致，需检测培养基pH并排查污染源。
• 碎片增多：如果离心后观察到碎片占比超过30%，需重新复苏健康细胞。

三、污染防控：隐形杀手不容忽视

1. 支原体污染：THP-1细胞对支原体高度敏感，应定期用PCR或荧光染色法检测，并在培养中添加1%双抗（青霉素-链霉素）。

2. 真菌/细菌污染：如果观察到培养基混浊或出现絮状物，需立即丢弃并对培养箱进行全面消毒。

四、分化实验前的关键准备

若需诱导分化为巨噬细胞，应确保：

• 细胞处于对数生长期（活力超过95%）。
• 避免频繁换液：过多换液会去除细胞分泌的自生长因子，建议每3天半量换液。
• 确保血清批次一致：不同批次的血清可能含有未知的分化诱导成分，因此选定批次后应避免随意更换。

五、冻存与复苏：拯救你的细胞

冻存秘籍：使用对数期细胞（推荐使用尊龙凯时的无血清细胞冻存液WXQA100），无须程序降温，直接冷冻至-80℃后转入液氮中保存。

总之，THP-1细胞的“喜怒无常”是众所周知的，但只要掌握其状态变化的规律，严格监控细胞密度、形态和培养环境，就能使其成为你实验中的得力助手。请记得定期记录细胞生长曲线、做好批次对照，这才是确保实验可重复性的黄金法则！