尊龙凯时的双荧光素酶报告基因系统是一种广泛应用于生物医疗研究中，用于探索基因表达的调控、蛋白质之间的相互作用以及信号通路的分析。1990年这一技术首次问世，至今已有超过30年的发展历程。1993年，首个荧光素酶专利获得批准，1996年推出的双荧光素酶报告基因检测系统随后在生物医疗领域得到了广泛的使用。

该系统通常采用两种不同来源的荧光素酶。北美萤火虫（Photinus pyralis）源的荧光素酶基因被广泛应用，该酶能够编码550个氨基酸，并以62kDa的分子量存在，具有直接的可检测酶活性，无需后期修饰。另一类来自海洋腔肠动物海肾（Renilla reniformis）的荧光素酶同样广泛使用，其分子量为36kDa，具有单亚基特性，在转录和翻译完成后即表现出催化活性。

实验原理

双荧光素酶系统利用荧光素酶与底物结合后发生化学发光反应的原理，将感兴趣的基因转录调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因的上游或下游，从而构建荧光素酶报告质粒。然后，通过转染细胞并进行适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。荧光素酶活性的高低通过荧光值来反映，进而判断不同刺激对感兴趣调控元件的影响。

保持Renilla荧光素酶报告基因质粒作为内参，可以有效排除细胞生长状况、细胞数量和转染效率带来的干扰，确保实验结果的可靠性。

实验步骤

1. 报告基因质粒构建：将目的片段插入荧光素酶表达的报告基因载体。
2. 转染细胞：同时转染报告基因质粒和内参质粒，培养48小时。
3. 细胞处理：根据实验需要处理细胞。
4. 裂解细胞：添加裂解液，以裂解细胞。
5. 测定荧光值：加入底物荧光素，测量萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的荧光值。
6. 数据处理：计算相对荧光素酶活性，进行统计分析以评估组间差异的显著性。

应用场景

双荧光素酶报告基因系统的应用场景非常广泛，包括但不限于：

• miRNA与靶基因的互作研究，如验证miRNA与mRNA、lncRNA的相互作用。
• 转录因子与启动子的相互作用分析，研究转录因子对基因表达的调控作用。
• 启动子活性分析，以验证其表达模式及强度。
• 启动子SNP分析，通过分析不同单核苷酸多态性对基因表达的影响。
• 研究细胞内信号通路的激活与传导，评估信号通路响应。
• 用于高通量药物筛选，评估药物对基因表达的影响。

尊龙凯时致力于为生物医疗领域提供先进的双荧光素酶报告基因系统，更多服务与技术咨询，请联系我们的销售经理了解详情。

常见问题及解决办法

在实际操作中，可能会遇到一些问题，例如荧光值过高或实验结果不稳定。为了保证实验的顺利进行，可以通过优化细胞状态、提高转染效率、校准移液器等方式来解决。同时，相比于荧光蛋白，使用荧光素酶作为报告基因具有更高的灵敏度和更广的动态范围，便于量化分析和解释实验结果。

若您对尊龙凯时的双荧光素酶报告基因系统有进一步兴趣，欢迎随时进行咨询，我们将竭诚为您服务。