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琼脂糖凝胶电泳问题及尊龙凯时解决方案

发布时间:2025-03-20   信息来源:尊龙凯时官方编辑

尊龙凯时推出的琼脂糖凝胶电泳技术是以琼脂或琼脂糖为支持介质的一种高效电泳方法。对于分子量较大的样品,如大分子核酸及病毒,建议使用孔径较大的琼脂糖凝胶来进行电泳分离。

琼脂糖凝胶电泳问题及尊龙凯时解决方案

在进行琼脂糖凝胶电泳时,常见的问题及其解决方案包括:

DNA带模糊或降解

避免核酸酶污染,确保电泳缓冲液的新鲜度。电泳缓冲液使用后,离子强度可能降低,pH值上升,建议定期更换以维持缓冲能力。此外,电泳电压不应超过20V/cm,温度应保持在<30℃,对于巨大的DNA链,温度需控制在<15℃。

DNA样品问题

上样量过多会导致电泳不理想,应适当减少;同时,如果DNA样品中含盐量过高,可以通过乙醇沉淀去除多余的盐分。若存在蛋白污染,建议在电泳前进行酚抽提以去除蛋白质。

电泳条件的调整

对于λ/HindⅢ片段的检测,建议在电泳前65℃加热DNA5分钟,然后迅速冷却。在电泳条件方面,确保电压不超过20V/cm,温度控制在<30℃,并定期更换电泳缓冲液。

突出问题与解决方案

DNA带的强度不足可能表示上样量不够,可以适当增加;相对于琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳的灵敏度更高,因此上样量可适度降低。为避免DNA降解,应关注核酸酶的污染。

优化电泳操作

为了防止DNA带跑出凝胶,建议缩短电泳时间,降低电压,或增强凝胶浓度。在使用EB染色的DNA时,应使用适合的光源,最好选择短波长(254mm)的紫外光源。

分辨率提升

对于分子大小接近的DNA带,增加电泳时间并优化凝胶浓度可以提高分辨率。电泳前避免对DNA链的高温加热,以20mM NaCl缓冲液稀释DNA。

实验注意事项

在实验中,确保关键试剂如引物、酶和超纯水未被污染。在配制体系时,保持实验区域的清洁,建议使用酒精喷雾来固定空气中的DNA,且全程戴手套以减少污染风险。

使用PCR体系时,建议借鉴业界成熟的老体系进行实验,以达到更佳效果。为了获取理想的电泳图像,建议在PCR开始时就准备凝胶,并在完成PCR后将样本保存在4℃的条件下。

加样时,建议使用排枪上样,不仅可以提高效率,且能确保样本进入胶孔的速度一致,最好采用进口枪头。此外,无论电泳室使用频率如何,建议每次进行琼脂糖凝胶电泳时更换电泳液,以避免出现异常条带。

选择尊龙凯时的琼脂糖凝胶电泳技术,确保您在实验过程中获得准确可靠的结果。