在生物医药领域，通过体外转录（IVT）获得的mRNA反应混合物通常不仅包含所需的mRNA产物，还混杂有多种杂质，包括T7 RNA聚合酶、无机焦磷酸酶、NTP、模板DNA、盐离子及IVT反应中产生的副产物（如双链RNA和截断RNA片段）。这些杂质的存在可能会对mRNA的功能产生负面影响，如降低其翻译效率、影响免疫原性以及影响mRNA的量化精确性。因此，采用有效的纯化技术将目标mRNA从IVT混合物中分离出来，确保其纯度和完整性，对于确保产品的安全性和有效性至关重要。

常见的mRNA纯化方法

常见的mRNA纯化方式主要包括氯化锂（LiCl）沉淀、硫酸铵沉淀、磁珠纯化、硅胶柱膜纯化和层析纯化等。沉淀、磁珠和硅胶柱方法的操作相对简单，但由于纯化效率有限，通常应用于科研和早期研究中，而在工业生产中，层析纯化方法是主要的选择。

氯化锂沉淀法

氯化锂沉淀是一种传统的mRNA纯化方法，利用锂离子在特定pH环境下能够减少RNA分子之间的同电性排斥，从而促进RNA聚集。虽然该方法在小规模实验中有效，但在工业生产中由于残留锂盐的潜在毒性以及对低温操作的需求，其成本较高且对设备要求严格。

硫酸铵沉淀法

2024年1月，中科院过程工程研究所的研究表明，在硫酸铵浓度达18M时，mRNA的沉淀率超过95%。相较于氯化锂，硫酸铵沉淀法可以在室温下进行，适用于工业生产。最佳的沉淀条件被推荐为2M硫酸铵，pH 7.0，温度20℃，沉淀率和溶解率均接近100%。

硅胶柱膜纯化

硅胶柱膜纯化利用硅胶表面的硅醇基团与mRNA的相互作用。在高盐条件下，盐离子可屏蔽mRNA与硅胶膜之间的静电排斥，促进其结合。此方法高效且简便，是实验室和早期研究中常用的选择，同时具有环保特性，保证实验人员的安全。

磁珠法

磁珠法采用表面修饰的氧化铁磁珠，与mRNA结合以实现纯化。该方法具有较高的选择性，但在操作时需避免对磁珠的破坏。注意控制使用条件，以确保mRNA的完整性。

层析法

在工业级别的mRNA纯化中，层析法被广泛应用。Oligo(dT)亲和色谱依赖于与Poly(A)尾的结合，而疏水层析和阴离子层析则作为精细的纯化手段，常与Oligo(dT)联用。需根据mRNA序列长度和生产需求，在开发过程中优化操作参数。

蛋白酶K纯化

当前大部分mRNA纯化工艺为：TFF1-层析-TFF2。在IVT产品质量高时，可以采用蛋白酶K进行下游纯化，去除未结合的蛋白质。然而，蛋白酶K可能具有一定的免疫原性，影响mRNA疫苗的安全性，因此在添加量上需谨慎平衡。

尊龙凯时的mRNA纯化服务

尊龙凯时通过自主研发的mRNA纯化工艺，为客户提供工业级定制化的mRNA原液生产服务。针对不同类型的mRNA，尊龙凯时还提供相应的工艺开发服务，以提升mRNA的完整度和减少杂质。我们的试剂盒在科研和早期阶段中表现优越，简化了操作流程，并提供高效、环保的解决方案。

尊龙凯时致力于为客户提供高性能的酶原料、化学底物、IVT试剂盒以及全面的质控服务，助力生物医药研究进步，为新药开发提供强有力的支持。