## 人结肠腺癌细胞LS1034培养指南

### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：人结肠腺癌细胞LS1034
**生长特性**：贴壁生长
**冻存条件**：无血清冻存液
**培养体系**：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
**传代方法**：首次建议1:2传代
**传代情况**：每2天更换培养液
**备注**：请将无菌离心管收集的培养基保留，以便作对比。如果对比培养效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

### 二、细胞接收后的处理

在细胞恢复良好状态后，建议灌注完全培养液并封闭瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内，进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（最好拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片将默认收到状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后将瓶盖拧松。

### 三、细胞培养步骤

**a. 细胞传代**：如果细胞未超过80%汇合度，将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱内培养。如果细胞密度超过80%，进行以下传代操作：

1. 弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察，若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻拍培养瓶，加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管，并在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

**b. 细胞冻存**：

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观测细胞状态，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，添加1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接置于-80℃冰箱中。如果后续要转移到液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上，然后再转入液氮罐中。

**c. 细胞复苏**：

1. 从液氮中取出冻存管（请务必佩戴防护面具），快速放入37℃水浴解冻，直到冻存管内无冰晶后，用75%酒精擦拭冻存管外。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，以5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶内，培养于37℃、5% CO2的细胞培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

在运输过程中，细胞可能因粘附不牢而掉落，这是正常现象。如脱离细胞较多，可将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟，随后加入5ml完全培养基终止反应，再离心、去上清后，加1-2ml培养基重悬。继续按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

### 五、售后条款

1）出现问题的细胞可重发的情况及判定标准：
- 细胞运输途中遭遇的问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，可重发；
- 收到后的48小时内提供真实实验结果，确认污染问题后可重发；
- 对于常温发货的细胞，静置24小时后，干冰运输的细胞复苏24小时后，若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
- 若干冰运输的细胞复苏后24小时未存活，或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染，均可重发；
- 细胞活性问题需在收到产品7天内给出真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，确认后可重发；
- 收到当日及2、3天内需拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供前3天的照片及操作步骤，经过技术人员沟通后判断我方责任，决定是否重发。

2）不予重发的情况包括：
- 客户造成的细胞污染不重发；
- 客户不当操作导致细胞状态不佳不重发；
- 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳不重发；
- 未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
- 细胞培养时经过其他处理的不重发；
- 在收到细胞2天内未告知问题的不重发；
- 根据具体情况处理。

本指南旨在为尊龙凯时的用户提供详细且清晰的细胞培养及管理指导，确保在细胞实验中的规范操作，从而得到可靠的实验结果。